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ELISA試劑盒實驗必看,ELISA實驗的操作要點

2017-11-08 [1960]

ELISA試劑盒應(yīng)嚴格遵照規(guī)定操作,必能得出準確的結(jié)果。首先應(yīng)選取的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。所以ELISA試劑盒的購買,試劑質(zhì)量的保證以及實驗前實驗儀器的檢察都是很重要的。
一、標本的采集及保存
1、血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4、樣本處理:血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍。
注:以上標本置4℃保存應(yīng)小于1周,-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存,-20℃不應(yīng)超過1個月,-80℃不應(yīng)超過2個月;標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
二、試劑的準備 
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑. ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液應(yīng)用pH計測量較正.從冰箱中取出的試 驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用.試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
三、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
四、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
五、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
六、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
七、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
    講述完了以上ELISA試劑盒實驗的操作要點,可以發(fā)現(xiàn)其實很多步驟都并不復(fù)雜,重要的是操作的時候一定要注重細節(jié),熟能生巧,才可以掌握ELISA實驗的精髓所在。
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